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闫新华

作者:    来源:    发布时间:2014/6/10 16:07:29

     闫新华研究员——毛皮动物疾病控制专家

     中国农业科学院左家特产研究所研究员

     著名毛皮动物疾病防治专家

     作品介绍:

     1、<<水貂肠炎病毒高免卵黄抗体的制备及应用>>

      水貂肠炎病毒高免卵黄抗体的制备及应用

      闫新华 闫喜军 赵传芳 王长凤 吴威 肖长灵

   摘要 用水貂肠炎病毒免疫蛋鸡制备卵黄抗体,结果表明,经5次免 疫制备的卵黄抗体,于最后一次免疫第10天AGP效价达132;第30天效价为18。该抗体较 稳定,4℃保存120天、-20℃保存180天效价不变。用该抗体治疗细小病毒肠炎病犬,治愈率 达93.9%,证实用水貂肠炎病毒制备卵黄抗体是成功的,可用于犬细小病毒肠炎的治疗。

      关键词 水貂肠炎病毒; 卵黄抗体; 病犬; 治疗

      中图分类号 S858.9;S852.43;文献标识码 B 文章编号1008-0589(2000)04-0306-02

        Preparation and Application of High Immune Yolk Antibody against Mink Enteritis Virus

        YAN Xinhua,YAN Xijun,ZHAO Chuanfang,WANG Changfeng,WU Wei,XIAO Changling

       (Speciality Institute of CAAS,Jilin 132109)

  Abstract Lay eggs chicken were immunized with mink Enteri ti s Virus to prepare Yolk antibody,The result shows that yolk antibody titer of AG P is 132 at 10th day after of last one immunity of 5 times immunity and titer is 18 at 30thd.The antibody is stable,titer is not change at 4℃120d and -20℃ 180d storage.Parvovirus infected ill dogs were cured with the antibody,Cu re rate is 93.9%,It confirmed that prepared yolk antibody with mink Enteritis Vi rus is successful.It may be used to cure dog Parvovirus enteritis.

      Key words Mink enteritis virus; Yolk antibody; Ill dog;  Cure

   应用产蛋鸡制备鸡源高免卵黄抗体用于发病鸡治疗效果十分显著[1~4 ],抗体效价高,也较稳定,制造成本低,可大批量生产。用猪大肠杆菌异源动物病原制 备卵黄抗体[5]也证实对仔猪黄白痢有较理想的防治效果,抗体使用安全,对仔猪 不产生任何副作用。

       本试验以水貂肠炎病毒(Mink Enteritis Virus,MEV)作为免疫原对蛋鸡进行免疫制备卵黄抗 体,旨在用于发生病毒性肠炎的病犬治疗。

       1 材料和方法

       1.1 免疫原 用猫泛白细胞减少症病毒(FPV)同步感染猫肾传代细胞,培养 4~5天出现明显的细胞病变时,用胶刷刮下细胞,离心去掉上清,收集感染细胞,再超声裂 解细胞,使病毒充分释放,然后离心收集上清,即为试验用抗原。

       1.2 试验用鸡 由中国农业科学院特产研究所养犬基地提供的产蛋鸡

       1.3 佐剂免疫原制备 水相:病毒抗原96份,吐温-85 4份;油相:白油90 份,司盘-85 10份,按11将水相缓慢加入油相中,用乳钵研磨,使水相完全包入油相中,最后体积仍为油相体积。

       1.4 免疫方法 总计免疫5次,剂量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5m l, 每次间隔7日,胸肌多点注射,最后一次免疫7天翅静脉采血分离血清,当血清AGP效价达1 32时,收集蛋并监测其效价,直至AGP效价在18以下时停止收集。

       1.5 卵黄抗体的提取 将蛋用2%的碘酊在一端消毒,揭开蛋壳0.5cm2, 倾出卵黄,加入等量的灭菌生理盐水中,搅拌均匀后加入2倍量的三氯甲烷,充分振荡后放 置过夜,3000r/min离心20分钟,上清即为卵黄抗体,AGP效价为116(20天采集的卵混合后 平均效价),按总量加0.5%的石碳酸,无菌分装,分别放4℃保存和-20℃冻存。

       1.6 卵黄抗体对发病犬治疗试验 对某养犬场临床和实验室确诊为细 小病毒肠炎感染的33只离乳仔犬用制备的卵黄抗体进行治疗,评价临床效果。

       2 结 果

       2.1 免疫鸡状态 蛋鸡免疫后体温、食欲均正常,接种部位无肿胀和硬结 ,吸收良好,与对照群相比,在免疫期间产蛋率下降3%。

       2.2 血清抗体和卵黄抗体效价比较 通过对免疫鸡血清抗体和卵黄抗体检 测比较,证实前者比后者抗体始终高一个稀释度。

       2.3 卵黄抗体持续的时间 当最后一次免疫第10天时,AGP测定卵黄抗体效 价为132,即开始收集卵,通过抗体监测,直到从收集卵之日起到第8天时下降到116; 到第20天时卵黄抗体下降到18;第24天时下降到14。

       2.4 提取的卵黄抗体特性 用三氯甲烷提取的卵黄抗体清澈透明,加入防 腐剂后长时间放置不出现沉淀和絮状物,每个鸡卵平均可提取15ml,提取后的卵黄抗体效价 与未提取前用灭菌生理盐水11稀释的卵黄液抗体效价一致。

       2.5 卵黄抗体的稳定性 将4℃和-20℃保存不同时间的卵黄抗体进行测定 ,结果见表1。

      表1 两种条件不同时间保存的卵黄抗体效价

       Table 1 Titers of yolk antibody stored at 4℃ and-20℃

        保存条件

Storage condition 保存日期(天)及其效价

Storage date (day)and titer 

0 30 60 90 120 180 210 240 300 360[)〗 

4℃ 132 132 132 132 1 32 116 18 14 14 14 

-20℃ 132 132 132 132 132 132 116  116 18 18

        2.6 卵黄抗体对细小病毒肠炎感染犬治疗效果 用卵黄抗 体对33只患细小病毒肠炎离乳仔犬的临床治疗,效果十分理想,治愈31只,治愈率为93.9 %,病犬注射卵黄抗体后无不良反应,详见表2。

        表2 卵黄抗体对病犬的治疗效果

        Table 2 Cure effect of yolk antibody for ill dogs

        病犬数(只)

        Ill dog

        numbers 卵黄抗体

        每次用量(ml)

        E.doses of

        yolk antibo dy 抗体

        效价

        Antibody

        titer 使用抗体两次

        间隔时间(天)

       Two tim es interval

       of user antibody 治愈数(只)

       一次 二次 三次

       Cure numbers(single )

       once twice three 未治愈数(只)

       Not be cure

       numbers(single) 总治愈率(%)

       Total cure(rate) 

       33 5 116 3 9  13  9 2 93.9

       3 讨 论

       以水貂肠炎病毒免疫蛋鸡制备的卵黄抗体于最后一次免疫第10天抗体AGP效价达132,持续 8天下降到116,第20天下降到18,证实用异源动物病毒免疫蛋鸡也可产生较稳定的高效 价卵黄抗体。

       制备的抗水貂肠炎病毒卵黄抗体于4℃保存120天、-20℃保存180天效价不变,而于4℃保存2 10天、-20℃保存300天,其AGP效价为18,仍可用于发病犬的治疗。

用制备的卵黄抗体对发病犬治疗,治愈率为93.9%,证实该卵黄抗体具有较理想的特异治疗 作用。

      目前,抗犬细小病毒肠炎血清多用健康犬免疫制备,不仅成本高,而且反复捕捉犬也较困难 ,增加了试验的难度,用蛋鸡制备卵黄抗体简便,制造成本低,每只免疫鸡平均可收集20枚 蛋,提取300ml卵黄抗体,而且在免疫期间基本不影响产蛋率,是大批生产异源动物抗体的 一个可行途径。

      闫新华(中国农业科学院特产研究所,吉林 132109)

      闫喜军(中国农业科学院特产研究所,吉林 132109)

      赵传芳(中国农业科学院特产研究所,吉林 132109)

      王长凤(中国农业科学院特产研究所,吉林 132109)

      吴威(中国农业科学院特产研究所,吉林 132109)

      肖长灵(大庆市杜尔伯特蒙古族自治县 兽医卫生防疫站,泰康 166200)

      参考文献

    [1] 申胤生,张志诊,黄明荣.中国家禽,1995,(4):12.

    [2] 李景水,张国玲.中国兽医科技,1997,27 (8):24.

    [3] 张歧蜀,胡子信,门常平.北京农学院学报,1994,9 (2):110~113.

    [4] 由善智,崔卫东,李洪斌.黑龙江畜牧兽医,1995,(10):5~8.

    [5] 胡子信,袁新,张歧蜀.中国畜禽传染病,1994,(2):26~28.

       2、〈〈我国珍贵毛皮动物疾病流行特点及防治中存在的问题〉〉

我国毛皮动物的养殖发展迅速,规模化、密集化饲养程度越来越高,随之而带来的环境微生物生态平衡受到破坏,有害微生物增多,病原的污染面加大,导致疫病流行的种类有日益增多趋势。每年由于多种复杂疫情的发生导致的死亡数平均可达10 % ~ 20 %之间。这是当前毛皮动物养殖的一大障碍,也是生产效益低的一个重要因素。

      1 流行特点

      1 . 1 由于动物宿主与病原体长期受到诸如免疫接种、应激反应、环境因素、饲养方式、免疫缺陷、免疫不应答、个体健康状态、化学药物等的影响,导致某些疫病的流行特点、临床症状发生变化,表现流行缓慢,不典型亚临床病例增多或呈散发形式流行。如犬瘟热、细小病毒性肠炎、狐狸脑炎、水貂阿留申病、水貂克雷伯氏菌病、流行性感冒、水貂的流行性腹泻、仔兽的大肠杆菌感染、皮肤疥螨病、附红细胞体病等。

     1 . 2 病原毒力或抗原型出现新的变化。有些疫病病原毒力表现增强,出现了强毒或超强毒株,虽然已进行了免疫接种,但仍未能获得保护或保护力低,出现免疫失败现象,这种情况几乎每年都有,通过大剂量紧急接种结合使用能激活免疫系统的免疫增强剂才能控制住。

      1 . 3 新发生的疫病种类增多,近几年,毛皮动物流行很多新病,如附红细胞体病、化脓性子宫内膜炎、支原体感染、皮肤真菌病、水貂的流行性腹泻、貉大爪病等,这无疑给该项养殖和防治带来了新的问题。

      1 . 4 混合感染病例增多,病情复杂,危害程度加大,特别是一些条件性、环境性病原微生物所致疾病有所增加,如大肠杆菌病,绿脓杆菌感染,克雷伯氏菌病,葡萄球菌感染,皮肤疥螨和真菌病等.往往很多病毒性疫病一般都伴有条件性细菌合并感染,使病势加重,死亡率增高,这给诊断和防治带来更大的困难.

      1 . 5 细菌性疾病和外寄生虫病危害日益严重,尤其是皮肤疥螨几乎在全国范围内广泛流行,不仅增加了治疗费用,而且严重影响毛皮质量。

      1 . 6 时常出现不明原因的猝死、临床和病理检验可见有心源性的、脑源性的、肝源性的、脾源性的、肺源性的及肾源性的,即动物死亡后,上述某一器官发生极显著的病理变化,但都检测不到病原微生物,目前,对毛皮动物的猝死问题还缺乏明确的诊断依据。

      2 防治中存在的问题

      2 . 1 不注重饲料、饮水、环境卫生及提高健康状况,把希望全寄托于好的疫苗和药物上,这是疫病流行和泛滥的一个重要因素,特别是条件性病原微生物的侵染,与兽场的卫生有直接关系,疥螨的发生与温度、湿度、光照、通风、卫生等环境因素密切相关。

      2 . 2 抗菌素的滥用或剂量、疗程不足,过度依赖抗菌素,在饲料中长期添加化学药物,导致耐药菌株的产生,出现抗药性和二重感染,结果导致越治越重的局面。

      2 . 3 疫病诊断技术落后,缺乏对某些疾病快速准确诊断方法,这是导致疫情蔓延和错过治疗机会的一个重要原因.

      2 . 4 粪便蓄积,不及时清除,特别是在夏秋季节,粪便发酵,恶臭,产生大量的氨,刺激上呼吸道,支气管肺炎感染病例增多,兽场不驱蝇,苍蝇铺天盖地,极易传播疾病。

      2 . 5 随意解剖尸体,没有防护措施,剖检过的尸体不进行深埋或焚烧处理,到处乱扔,造成环境污染,病原扩散。 

      2 . 6 对药物的性能和配伍禁忌缺乏了解,结果造成药物失效或药效降低,如青霉素与维生素 Bl 、维生素 C 合用可破坏青霉素的功效;青霉素与庆大霉素合用可降低疗效:头孢菌素类和青霉素均不能与酸性(如维生素 C)或碱性(如碳酸氢钠)药物配伍;青霉素与黄连素配伍可产生沉淀反应;氯霉素不能与青霉素、氨节青霉素及磺胺类配伍:地塞米松不能用于病毒性疾病感染的治疗等,这些都是必须了解的用药常识,应引起重视。否则,临床上就会出现治疗效果不佳或越治越重的结果。

       综上所述,我国毛皮动物疫病的防治还仍然存在很多问题急待解决,从事此方面工作的科技工作者应不断探索,特别是在疫病的快速准确诊断及新的高效疫苗和药物的开发、病原的自然变异、疫病的流行病学和分子流行病学及发病机制、环境卫生和环境生态保护方面应加大力度研究,以推动我国毛皮动物的健康养殖,获得更高的经济、社会和生态效益。

     3、〈〈毛皮动物消化、呼吸、泌尿系统疾病及脑炎常用药物问答〉〉:

     1  治疗毛皮动物消化系统疾病常用药物有哪些?

     治疗毛皮动物消化系统常用药物有:1、抗菌消炎药:庆大霉素、卡纳霉素、氯霉素、黄连素、诺氟沙星、环丙沙星、磷霉素、土霉素、磺胺脒、痢特灵、穿心莲等。2、助消化药:VB1、乳酶生、胃蛋白酶等。3、收敛止泻药:药用炭、鞣酸蛋白、次硝酸铋等。4、消化道止血药:止血敏、仙鹤草索、VK3等。5、制酵药:鱼石脂、大蒜酊。6、消沫药:松节油、植物油。7、止吐药:胃复安、胃得灵、呕必停、爱茂尔、VB6、阿托品、氯丙嗪等。8、驱虫药:伊维菌素、通灭、净灭、左旋咪唑、驱蛔灵、肠虫清等。

      2  治疗毛皮动物呼吸系统疾病常用药物有哪些?

      治疗毛皮动物呼吸系统疾病常用抗菌药物有:青霉素、红霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、麦迪霉素、乳酸环丙沙星、链霉素、氧氟沙星、氟苯尼考、复方新诺明、磺胺嘧啶、板蓝根、大青叶等。

      3  治疗毛皮动物泌尿系统疾病常用药物有哪些?    

      治疗毛皮动物泌尿系统疾病常用药物有:青霉素、庆大霉素、阿莫西林、复方新诺明、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、小诺霉素、磷霉素等。

      4  治疗毛皮动物脑炎一般都选用哪些药物?

      治疗脑炎常用药物:磺胺嘧啶钠、氯霉素、青霉素、氨苄青霉素、氯丙嗪、硫酸镁、甘露醇等。

      4、〈〈狐貉犬瘟热,细小病毒性肠炎和脑(肝)炎流行病学调查〉〉

      摘  要:

      以现场查询病原,分离鉴定,病理学研究,免疫学诊断为基础,对1994~1998年我国15个省主要毛皮兽场狐、貉、犬瘟热、病毒性肠炎和脑(肝)炎进行调查。结果表明,狐、貉三大疫病在我国仍在继续流行,总体流行规律与年龄、性别、品种、饲养管理、饲养密度及应激有直接关系,调查结果证实三大疫病的流行,犬瘟热发生的频率最高,居主导地位;其次是细小病毒性肠炎和腺病毒脑(肝)炎。

      5、〈〈北极狐嗜水气单胞菌的分离与鉴定〉〉

      赵传芳,闫新华,王长凤,苌群红 

   从北极狐脏器中分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,经培养特征、形态、生理生化、致病力测定及药敏试验证实为嗜水气单胞菌 ,确定该菌为引起狐致死的病原菌

    【作者单位】:中国农业科学院特产研究所 吉林吉林132109 (赵传芳;闫新华;王长凤);中国农业科学院特产研究所 吉林吉林132109(苌群红)

    【关键词】:北极狐;嗜水气单胞菌;分离鉴定

    【分类号】:S858.92

    【DOI】:cnki:ISSN:1007-7448.0.2002-04-007

    【正文快照】:

      嗜水气单胞菌 [Aeromonashydrophila(chester)Staniev]为气单胞菌属的模式种 ,广泛存在于淡水、海水、土壤中及鱼类等脊椎动物的肠道中。近年来 ,由本菌引起的腹泻及其他感染的报道日益增多 ,但感染狐的报道甚少。 2 0 0 1年 9月 2 5日 ,辽宁省某养狐场饲养的 2 0 0只北极狐中 ,有 1 0只突然发病 ,2只死亡。病狐精神沉郁 ,食欲减退或废绝 ,呕吐 ,随后开始发生水样腹泻 ,最后排血便。剖检 2只死亡狐 ,其主要病变为肝肿大 ,质脆 ,肺脏出血 ,肠道粘膜出血 ,经实验室检查和动物感染试验证实了嗜水气单胞菌是引…

       6、〈〈我国毛皮动物疫病流行特点及防治中存在的问题〉〉

       中国农业科学院特产研究所   闫新华

       我国毛皮动物养殖业发展迅速,规模化、密集化饲养程度越来越高,随之而来的环境微生物生态平衡受到破坏,有害微生物增多,导

致流行疫病的种类日趋增多。每年由于多种疑难病症导致的死亡率平均可达10%~20%。这是当前毛皮动物养殖的一大障碍,也是生产效益低的一个重要因素。

      1、毛皮动物疫病流行特点

     (1)某些疫病流行特点和临床症状发生变化 由于动物宿主与病原体长期受到诸如免疫接种、应激反应、环境因素、饲养方式、免疫缺陷、免疫不应答、个体健康状态及化学药物等的影响,导致某些疫病的流行特点、临床症状发生变化。例如犬瘟热、细小病毒性肠炎、狐狸脑炎、水貂阿留申病、水貂克雷伯氏菌病、流行性感冒、水貂的流行性腹泻、仔兽的大肠杆菌感染、皮肤疥螨病、附红细胞体病、兔瘟、兔魏氏梭菌病等。

    (2)病原毒力或抗原型出现新的变化 有些病原毒力增强,出现了强毒或超强毒株。虽然已进行了免疫接种,但仍未能获得保护或保护力低而出现免疫失败的现象,这种情况几乎每年都有。通过大剂量紧急接种疫苗、结合使用能激活免疫系统的免疫增强剂才能控制疫情蔓延。

    (3)新发现的疫病种类增多 近几年,毛皮动物流行很多新病,如附红细胞体病、化脓性子宫内膜炎、支原体感染、皮肤真菌病、水貂的流行性腹泻、貉大爪症等,这无疑给养殖和防治带来了新的问题。

    (4)病情复杂、危害程度加大 混合感染病例增多,特别是一些条件性、环境性病原微生物所致的疾病有所增加。例如大肠杆菌病、绿脓杆菌感染、克雷伯氏菌病、葡萄球菌感染、兔的巴氏杆菌和魏氏梭菌感染、皮肤疥螨和真菌病等。往往很多病毒性疫病一般都伴有条件性细菌合并感染,给诊断和防治带采了更大的困难。

    (5)细菌性疾病的外寄生虫病危害日趋严重 尤其是皮肤疥螨,几乎在全国范围内广泛流行,不仅影响动物生长发育和增加了治疗费用,而且严重地影响了毛皮质量。

    (6)时常出现不明原因的猝死 临床和病理检验可见有心源性的、脑源性的、肝源性的、脾源性的、肺源性的及肾源性的猝死,即动物死亡后,上述某一器官发生极显著地病理变化,但都检测不到病原微生物。目前,对毛皮动物的猝死问题还缺乏明确的诊断依据。

      2、毛皮动物疫病防治中存在的问题

    (1)饲养管理不当 不注重饲料、饮水、环境卫生及提高健康状况,只把希望寄托于好的疫苗和药物上,这是疫病流行和泛滥的一个重要因素。特别是条件性病原微生物的侵染,与兽场环境及笼舍的卫生有直接关系,例如疥螨的发生与温度、湿度、光照、通风、卫生等环境因素密切相关。

    (2)滥用抗菌素和化学药物 滥用抗菌素或剂量、疗程不足,过度依赖抗菌素,在饲料中长期添加化学药物,导致耐药菌株的产生,出现抗药性和二重感染,结果导致越治越重的局面。

    (3)诊断不利 疫病诊断技术落后,缺乏对多种疫病快速、准确诊断的方法,这是导致疫情蔓延和错过治疗机会的一个重要原因。

    (4)环境卫生不良 粪便堆积,不及时清除,特别是在夏、秋季节,粪便发酵产生大量的氨,刺激上呼吸道,致使动物支气管肺炎感染病例增多。兽场不灭蝇,极易传播疾病。

    (5)尸体解剖操作不规范 随意解剖尸体,没有防护措施;剖检过的尸体不进行深埋或焚烧处理,到处乱扔,造成环境污染、病原扩散。

    (6)缺乏用药知识 对药物的性能和配伍禁忌缺乏了解,结果造成药物失效或药效降低。如青霉素与VB1、Vc合用可破坏青霉素的功效;青霉素与庆大霉素合用可降低疗效;头孢菌素类和青霉素均不能与酸性(如Vc)或碱性(如碳酸氢钠)药物配伍;青霉素与黄连素配伍可产生沉淀反应;氯霉素不能与青霉素、氨苄青霉素及磺胺类配伍;地塞米松不能用于病毒性疾病感染的治疗等。这些都是必须了解的用药常识,应引起重视,否则,临床上就会出现治疗效果不佳或越治越重的结果。

     综上所述,我国毛皮动物疫病的防治存在很多亟待解决的问题,从事此方面工作的科技工作者应不断探索,特别是在疫病的快速准确诊断、新的高效疫苗和药物的开发、病原的自然变异、疫病的流行病学和分子流行病学及发病机制、环境卫生和环境生态保护方面,应加大研究力度,以推动我国毛皮动物的健康养殖,获得更高的经济、社会与生态效益。